赛科成SKC900一次性搅拌式生物反应器,兼顾传统搅拌式生物反应器优良的混合搅拌效果与一次性产品的特点,在疫苗、重组蛋白、单抗、干细胞、外泌体等生物制品和新型疗法的上游制备中均有广泛应用。
概 述 :
本文使用200L SKC900一次性搅拌式生物反应器进行CHO-S细胞的中试培养,通过设定参数提供稳定可控的培养环境,并在培养过程中对pH、DO进行实时监测,并通过取样对培养上清中的成分、活细胞密度、细胞活率等进行离线分析。
材料与方法:
设 备:
耗 材:
在SKC900 200L一次性细胞培养袋中进行细胞培养。使用波纹管将2对传统电极进行固定。使用3D一次性储液袋储存大体积液体材料,使用2D一次性储液袋储存50L以下液体材料。使用200L一次性磁力搅拌袋,配合SKC400磁力搅拌配液系统进行溶液配制和转运。使用多联离心管取样套件进行取样。
图3:实验中用到的主要一次性耗材
试 剂:
CHO细胞无血清培养基,补料培养基1(使用浓度3%)和2(使用浓度0.3%),D-葡萄糖溶液300g/L。调节pH使用7.5% NaHCO3。消泡剂的用量在工艺范围之内。实验用水使用WFI。
细 胞 系:
CHO-S细胞从冻存管中复苏,在摇瓶中进行预培养,再转移至50L SKC600摆床反应器中进行扩增。接种至SKC900生物反应器时密度为5×105cells/mL。
图4:种子细胞的制备与放大培养
流 加 培 养:
将一次性细胞培养袋安装到SKC900生物反应器上,培养控制参数参见表1。使用SKC900控制系统对培养体系进行控制。细胞培养袋内加入95L 无血清培养基进行预培养,24h后待溶氧曲线平稳后,校准至100%,打开pH控制,平衡后接种至细胞密度5×105 cells/mL。培养温度维持在36.5℃。pH维持在7.0±0.2。DO值设置在40%,以提高蛋白质的最终积累量。
起始体积 |
120L |
培养温度 |
36.5℃ |
溶氧(DO) |
40% |
pH |
7.0±0.2 |
通气 |
顶通:空气(1L/min) 底通:空气(0.5L/min),O2(级联DO),CO2(级联pH),大泡0.5mm |
补料 |
从第3天开始,每隔一天加入3%的补料培养基1和0.3%的补料培养基2 |
葡萄糖 |
葡萄糖浓度低于4g /L时加入,使葡萄糖终浓度维持在6~8g /L |
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